Il percorso non è cambiato dal 2019, salvo qualche piccolo aggiustamento. Il ritrovo è alle 8 davanti alla Cattedrale di Santa Maria del Fiore, alle 8.30 si inizia (alle 8.27 partono gli atleti diversamente abili). Da lì si va sui viali, si costeggia la Fortezza Da Basso, si arriva alle Cascine e poi Oltrarno e San Frediano prima di passare da Ponte Vecchio poco prima della metà del percorso.
Una deviazione porta a Santa Croce, in seguito si va ancora sui lungarni, Campo di Marte, stadio Franchi, pista di atletica dell'Asics Firenze Marathon Stadium. Infine la corsa andrà in piazza Alberti, via Fra' Angelico fino a tornare in Piazza Duomo al traguardo. Indicativamente la manifestazione si chiude nel primo pomeriggio, verso le ore 14:00.